許多細胞系容易適應無血清培養基和無蛋白培養基，而對環境要求過高的其它細胞卻難以適應變化，這就需要更為專業的方法來適應變化。而根據細胞系的特性，有兩種方法可使細胞快速適應無血清培養基：種方法是連續適應/循序隔絕法；另一種方法是直接適應。

一、連續適應/循序隔絕法

先來介紹種方法：連續適應/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟，使細胞適應無血清培養基。這是優先選用的方法，且不對細胞培養環境形成太過惡劣的影響。以下是這種方法的兩種操作步驟：

種操作步驟：

使原培養基內的細胞連續地經過以下幾個階段：

階段1：75%補加血清的培養基或25%無血清培養基

階段2：50%補加血清的培養基或50%無血清培養基

階段3：25%補加血清的培養基或75%無血清培養基

階段4：100%無血清培養基

第二種操作步驟：

1、以原培養基中的相同濃度，將血清加入無血清培養基內。將細胞從含血清的原培養基轉移到加了血清的無血清培養基，此時應注意要提培養系統中的細胞密度。讓細胞有一個適應過渡期。

2、按照種操作步驟流程，緩慢地降低血清濃度，使細胞在每個階段有適應的時間。

3、一旦血清補加量降為0，在用于進行分析或其他操作前，讓細胞培養物具有數個適應過渡期。

二、直接適應法

現在來介紹第二種方法：直接適應。以下是操作步驟：

細胞直接從含血清培養基轉移到無血清培養基內。將大量細胞直接轉移到無血清或無蛋白的新培養基內。細胞必須處于指數生長期中期，且存活率>90%。

每3-4天更換約50%的培養基，以防止培養基變成酸性。維持高于正常值的細胞培養密度，直至培養的細胞需要每日更換培養基。這時，將細胞擴增到多個培養瓶內。

操作注意事項

圖片

在適應過程中，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感，讓細胞在每個階段都至少有一個適應過渡期。

1、細胞存活率和細胞密度

細胞在對數生長期中期快速分裂，且在適應過程開始時，存活率大于90%。這一點至關重要。當細胞需傳代時，建議采用1:2或1:3的小傳代比例，以維持更高的細胞密度，同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子。當細胞適應新的培養條件時，再增大細胞傳代密度。

2、細胞生長

如果在適應過程中，細胞停止了生長，則需讓細胞有更多的時間來適應培養基組合。例如，在種操作步驟的階段4，向無血清培養基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細胞更容易地適應新的培養基。然后，在幾個過渡期內，緩慢地減少血清量，直至血清量為0。

3、懸浮培養物

無血清培養基和無蛋白培養基不含血清中有可能會發現細胞附著延伸影子。在一段過渡期內，貼壁細胞將開始離開表面，并成為懸浮細胞系開始生長。細胞也可能因適應而發生形態變化。監測細胞的生長速度，只要細胞能夠與新系統相融合，任何形態變化都不重要。

4、細胞叢

在適應無血清培養期間，細胞容易形成叢。傳代培養時，將叢輕輕折斷，使其分散開。將培養物從靜止細胞培養瓶內轉移到可旋轉錐形瓶內，這樣可能會有助于防止細胞叢的形成。

5、抗生素

由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此，不建議在無血清適應過程中使用抗生素。如不存在血清蛋白，則抗生素水平可能會對細胞產生毒性。

6、預防措施

確保在開始適應過程前，儲存有大量原培養基的細胞。如果細胞沒有存活到下一階段，則在整個過程中保存每一階段使用的培養瓶。